Clostridium botulinum comprende bacilos Gram positivos grandes (0.5–2 × 1.6–22 µm), móviles (flagelos peritricos), anaerobios estrictos y formadores de endosporas subterminales/terminales deformantes (aspecto en "raqueta"). Es el agente causal del botulismo (alimentario, infantil, por heridas e iatrogénico), una parálisis flácida simétrica descendente mediada por la neurotoxina botulínica (BoNT), una de las sustancias biológicas más potentes.

Algoritmo e identificación microbiológica:

• Morfología y cultivo: Bacilos Gram positivos esporulados. En Agar Sangre Yema de Huevo (incubación anaerobia) desarrolla colonias iridiscentes con reacción de lipasa positiva (superficie con capa de aceite) y variable actividad de lecitinasa.

• Grupos fisiológicos: Dividido en cuatro grupos heterogéneos (I–IV); los grupos I y II son los principales causantes de botulismo humano.

Actualización tecnológica y de bioseguridad: Dado su elevado riesgo biocuantitativo (agente selecto de Bioseguridad Nivel 3), el cultivo de rutina es desaconsejado. El bioensayo tradicional de neutralización en ratón para la detección de neurotoxinas ha sido reemplazado por ensayos inmunoenzimáticos (ELISA) de alta sensibilidad, la prueba funcional Endopep-MS (cromatografía líquida/espectrometría de masas) y la PCR en tiempo real para la caracterización de los genes de toxina (bontA–bontG). La identificación de especie en aislados viables se realiza mediante espectrometría de masas (MALDI-TOF MS) con bases de datos restringidas de seguridad biológica.

Fuente:

1. Procop GW, Church DL, Hall GS, Janda WM, Koneman EW, Schreckenberger PC, et al. Koneman's Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. 7th ed. Philadelphia: Wolters Kluwer Health; 2017.

2. Carroll KC, Pfaller MA, Landry ML, McAdam AJ, Patel R, Richter SS, Warnock DW, editors. Manual of Clinical Microbiology. 12th ed. Washington, DC: ASM Press; 2019.

3. Tille PM. Bailey & Scott's Diagnostic Microbiology. 15th ed. St. Louis: Mosby/Elsevier; 2021.

Clostridium perfringens comprende bacilos Gram positivos grandes (1 × 3–8 µm), rectos, de extremos romos, inmóviles, anaerobios estrictos (tolerantes a breves exposiciones de O₂) y formadores de esporas (rara vez visibles en muestras clínicas o cultivos estándar). Es el principal agente etiológico de la gangrena gaseosa (mionecrosis clostridial), enteritis necrotizante e intoxicaciones alimentarias, mediado por exotoxinas potentes (toxina alfa / fosfolipasa C, toxina beta, enteroalérgenos).

Identificación microbiológica:

• Morfología y tinción: Bacilos Gram positivos gruesos en muestras de exudados de tejidos o frotis directos, típicamente acompañados de escasez de leucocitos (debido a la lisis provocada por las toxinas).

• Características de cultivo:

  • Agar Sangre (incubación anaerobia): Colonias redondas, lisas y convexas que presentan una doble zona de hemólisis característica (zona interna de β-hemólisis completa por la perfringolisina O y zona externa de α-hemólisis incompleta por la toxina alfa).

  • Medio Yema de Huevo (Egg Yolk Agar): Reacción de Lecitinasa positiva (zona opaca de precipitado alrededor de la colonia) y Lipasa negativa.

  • Prueba de Nagler: Neutralización de la lecitinasa mediante antitoxina alfa específica (inhibición del precipitado opaco en la mitad de la placa con antitoxina).

• Pruebas complementarias:

  • Inmóvil (diferencial clave frente a otros Clostridium spp. móviles).

  • Fermentación tormentosa en leche: Coagulación rápida de la caseína con fractura del cuajo por abundante producción de gas.

Actualización tecnológica y clínica: La prueba de Nagler en placa y la fermentación en leche han sido desplazadas progresivamente por la espectrometría de masas (MALDI-TOF MS) para la identificación rápida de especie. Para la caracterización de los cinco toxinotipos (A–E) y la detección del gen de la enterotoxina (cpe) en brotes alimentarios, se emplean paneles moleculares por PCR multiplex y secuenciación del genoma completo (WGS).

Fuente:

1. Procop GW, Church DL, Hall GS, Janda WM, Koneman EW, Schreckenberger PC, et al. Koneman's Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. 7th ed. Philadelphia: Wolters Kluwer Health; 2017.

2. Carroll KC, Pfaller MA, Landry ML, McAdam AJ, Patel R, Richter SS, Warnock DW, editors. Manual of Clinical Microbiology. 12th ed. Washington, DC: ASM Press; 2019.

3. Tille PM. Bailey & Scott's Diagnostic Microbiology. 15th ed. St. Louis: Mosby/Elsevier; 2021.

Esporas Clostridium tetani.